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細(xì)胞傳代
細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí).去培養(yǎng)基,10ml pbs清洗2次。加入3ml含0.25%edta的胰蛋白酶,人ips細(xì)胞相關(guān),放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml dmem完全培養(yǎng)基終止胰酶消化,轉(zhuǎn)移至15ml離心管。
加入10ml pbs清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤(pán),轉(zhuǎn)移至15ml離心管,2000rpmx2min,棄上清液。再加入10ml pbs(經(jīng)高壓滅菌,保存于40c),吹勻,吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù),按照1×106/盤(pán)接種,在含5%co2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
ips細(xì)胞這一名詞,全稱(chēng)為誘導(dǎo)性多能ips(induced pluripotent stem cell),縮寫(xiě)名來(lái)源于各個(gè)英文單詞的首字母。
胚胎ips的獲取,不可避免的要嚴(yán)重的傷害乃至殺1死胚胎,這在很多國(guó)家已經(jīng)是法律上的殺1人罪行了。所以,胚胎ips的相關(guān)研究在各國(guó)都受到嚴(yán)格監(jiān)管,實(shí)質(zhì)上陷于停頓,而ips細(xì)胞就不存在這樣的倫1理問(wèn)題,無(wú)需受精卵或胚胎,僅僅是提取一些體細(xì)胞,就可以將其轉(zhuǎn)化為與胚胎ips相同的多能細(xì)胞,可謂是巨大的進(jìn)步了。
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
高速冷凍離心機(jī)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中,困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。
⑴血1清:動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血1清。相對(duì)常用的是小牛血1清。血1清提供生長(zhǎng)必需因子,如激1素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里,血1清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營(yíng)養(yǎng)液。
⑵支持物:大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃,塑料等作為支持物。
⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié),不斷維持所需要的氣體條件。
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