探針法M.haemobos實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

探針法candidatus mycoplasma haemobos實(shí)時(shí)定量pcr試劑盒
probe-quantitative real-time pcr kit for candidatus mycoplasma haemobos
貨號(hào)：mqt-hbo-20 規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)
貨號(hào)：mqt-hbo-50 規(guī)格：50個(gè)反應(yīng)
貨號(hào)：mqt-hbo-100 規(guī)格：100個(gè)反應(yīng)
儲(chǔ)存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。
試劑盒特點(diǎn)：
本試劑盒可以特異性檢測(cè)candidatus mycoplasma haemobos，不受其他基因組干擾。 本試劑盒靈敏度高，反應(yīng)液中僅1個(gè)基因組時(shí)檢出率為69%。線性范圍跨越8個(gè)數(shù)量級(jí)。 本試劑盒使用的dna聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動(dòng)方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。 本試劑盒帶有陽性對(duì)照樣品（組分c），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。 帶有udg酶和dutp，可降低殘留dna的污染。
嗜血支原體（hemotropic mycoplasma，或hemoplasma)是一類寄生于紅細(xì)胞表面的細(xì)菌，無細(xì)胞壁，可以感染很多哺乳動(dòng)物，包括貓、犬、豬、牛、羊等，也包括人類。嗜血支原體曾被命名為血巴通氏體（hemobartonella）和附紅細(xì)胞體（eperythrozoon），根據(jù)16s rrna基因序列分析，被重新歸類為支原體。在牛體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)的嗜血支原體有兩種：維容氏支原體（mycoplasma wenyonii）和candidatus mycoplasma haemobos。
candidatus mycoplasma haemobos發(fā)現(xiàn)較晚，直至本世紀(jì)才有報(bào)導(dǎo)，分布較為廣泛，在中國、日本、瑞士、德國和巴西等都有發(fā)現(xiàn)，臨床癥狀尚不清楚。其16s rrna基因較維容氏支原體短，相似度僅81.2%，與貓血支原體有95%的相似度，因而在分類上與貓血支原體更為接近。
candidatus mycoplasma haemobos尚無合適的體外培養(yǎng)方法，因此難以開發(fā)蛋白類檢測(cè)方法。檢測(cè)方法一般采用吉姆薩染色的血涂片法。血涂片法的檢測(cè)靈敏度和特異性均比較差，容易受到人工制片方法和血液里其他成分的干擾，且支原體易從紅細(xì)胞表面脫落，造成漏檢。而pcr法在靈敏度上則有明顯的優(yōu)勢(shì)，且可以區(qū)分支原體種類。定量pcr法與普通pcr法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。
本試劑盒基于16s rrna基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，可以準(zhǔn)確識(shí)別candidatus mycoplasma haemobos，與其他生物基因組無交叉反應(yīng)。經(jīng)檢測(cè)，本試劑盒與維容氏支原體、貓和犬的3種嗜血支原體、及4種非嗜血支原體均無交叉反應(yīng)。
本試劑盒包含熱啟動(dòng)dna聚合酶、dntp（以dutp代替dttp）、引物、探針、陽性對(duì)照品、rox染料，和用以防止殘余dna污染的udg（uracil-dnaglycosylase，尿嘧啶-dna-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好dna樣品即可使用。
本試劑盒采用的dna聚合酶源自極端嗜熱菌（thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下dna聚合酶活性被抑制。在pcr循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時(shí)dna聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)”功能。熱啟動(dòng)可減少殘余dna的污染，提高pcr擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。
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