快切酶-友名生物(在線咨詢)

限制性內(nèi)切酶已有百余種，每種酶有其特定的核苷酸序列識別特異性，酶的活性需mg 2來激1活。不同的酶也有許多差別：有些酶除需mg 2外，還需atp 等其他輔助因子的激1活;切割位點(diǎn)和識別序列間的距離不同;有的內(nèi)切酶同時(shí)具有甲1基化作用。根據(jù)這些差別，可將限制性內(nèi)切酶分為i、ii 和iii 種類型。ii 型限制性內(nèi)切酶只需要二價(jià)鎂離子的激1活，酶在其識別序列內(nèi)切割雙鏈dna，產(chǎn)生的各種dna部分片段具有相同的末端結(jié)構(gòu)，而且大多數(shù)的ii 型酶可提供粘性未端，有利于片段再連接，大部分ii 型酶所識別的序列具有反向?qū)ΨQ的結(jié)構(gòu)，或稱之回文結(jié)構(gòu)。如ecori 和hindiii 的識別和切口分別為：
ecori ： g ↓aatt c hindiii ： a↓agct t
t tcga↑ a c ttaa↑g
非特異性內(nèi)切酶鑒定
為鑒定非特異性內(nèi)切酶污染，限制性內(nèi)切酶與缺少該酶識別序列的超螺旋dna底物溫育。對于rf i型dna(超螺旋形式)，快切酶，一個(gè)單一的非特異性缺口就會(huì)將它轉(zhuǎn)變成rf ii型dna(帶缺口環(huán)狀)。小份的限制性內(nèi)切酶與1μgdna在50μl反應(yīng)體系中，采用推薦的nebuffer，在推薦的溫度下溫育4小時(shí)。兩種形式的dna在瓊脂糖凝膠上很容易區(qū)分，可以計(jì)算出從rf i 到 rf ii的轉(zhuǎn)化率。
限制性酶切分析法
限制性酶切分析法是指*組或一段核酸用限制性內(nèi)切酶消化產(chǎn)生的片段經(jīng)電泳等方法分離形成特別的條帶圖譜，對dna序列的特征進(jìn)行的分析。限制性酶是生物體內(nèi)能識別并切割特異的雙鏈dna序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來的dna切斷的酶，即能夠限制異源dna的*并使之失去活力，但對自己的dna卻無損害作用。
限制酶是*工程中所用的重要切割工具。科學(xué)家已從原核生物中分離出了許多種限制酶，并且已經(jīng)商品化，在*工程中廣泛使用。根據(jù)限制酶切割的特點(diǎn)，可將它們分為兩大類：一類是切割部位無特異性的；另一類是可特異性地識別核苷酸序列，即只能在一定的dna序列上進(jìn)行切割。
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